天文七年（公元1538年），美浓的大守护代斋藤利良死去，没有后人。这时长井规秀又乘机兼并了斋藤的家业，自称起斋藤山城守规秀大人起来。次年，规秀扩张了原斋藤氏的城堡稻叶山城，将其加固成为万夫莫开的要害城塞，又收服了西美浓国内最有力的国人领主稻叶氏和氏家氏，并迎娶了东美浓的名族明智家的小姐当了侧室。规秀势力已经足够大，大到占据了美浓半壁江山，大到不再像个守护代，而像个真正的美浓守护的时候，那么正如我们所言，“下克上”的时机已经成熟了。

不过大约这时候，斋藤规秀认为他的主君土岐赖芸好糊弄的可以，便首先对土岐家的其他子嗣下手。首当其冲的是赖芸的弟弟，也是规秀的女婿，土岐七郎赖满，天文十年（公元1541年），规秀热情邀请赖满赴宴，赖满归家后突然七窍流血而死，法医鉴定为他人毒杀，幕后的凶手一目了然。赖芸再也忍受不住了，大发雷霆要领兵攻击规秀，规秀愣是一下子没反应过来——没想到这赖芸也会有性子啊。陷入穷地的规秀只得请求尾张国的大名织田信秀和南近江大名六角定赖前来当和事老，最终赖芸还是放过了规秀，其间规秀在常在寺出家，法号为道三，这就是咱们熟悉的美浓战国大名斋藤道三了，不过邻国的人们则更喜欢称呼他为“美浓的蝮蛇”。

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